新的一年，上海恒远技术专员为ELISA试剂盒新手入门的使用技术报告做出一番整理，在这里分享给您，仅供参考。

ELISA试剂盒方法原理

  一、双抗体夹心法测定抗原

1.将抗原免疫*种动物获得的抗体吸附于固相表面;

2.加抗原，形成抗原-抗体复合物; 

3.加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;

4.加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 

5.加底物。底物的降解量＝抗原量。

二、直接法测定抗原 

1.将抗原吸附在载体表面；

2.加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；

3.加底物。底物的降解量＝抗原量。 

三、间接法测定抗体

1.将抗原吸附于固相载体表面；

2.加抗体, 形成抗原-抗体复合物；

3.加酶标抗体；

4加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。

ELISA试剂盒操作注意

1. 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

2.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

3.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

4.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

ELISA试剂盒质控分析

  1.人员培训内容包括：①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理)；②熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成)；③熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识；④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

  2.基本了解

1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。

2.特点：ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。

3.酶标记免疫活性物质，进行信号放大；

4.有二步温育反应二次洗涤过程；

5.灵敏度特异性相对较高。

6.局限性：只能检测到ng水平

7.精密度差(批内CV15-20%)；

8.线性范围窄(一个数量级)；

9.存在"HD-HOOK"效应。 

    以上由上海恒远生化试剂有限公司技术人员整理，希望对新手朋友有所帮助，还需要了解更多详细内容可以我们。