通常每周五上海恒远都有资讯分享给大家,我公司今天要给大家带来的内容是实验室技术部对酶联免疫双位点一步法的评价,夏将此具体内容整理出,发布出分享给大家。
·操作步骤
1.将1个McAb与固相载体连接,形成固相McAb。洗涤除去未结合物。
2.同时加入待检标本和酶标McAb,温育,是待检抗原和固相McAb及酶标McAb反应形成双抗体夹心复合物。洗涤除去未结合物。
3.加底物显色。
适用于双抗体夹心法的酶联免疫试剂盒,有些也可用双位点一步法检测。如HBsAg同样可用此法进行检测,其原理为:将纯化的抗HBs吸附于固相载体表面,加入待检血清(或血浆),同时加入辣根过氧化物酶标记的另一个抗HBs(酶结合物),如血清或血浆中含有HBsAg,则通过温育形成固相McAb-HBsAg-酶标McAb复合物,加入底物,通过显色反应进行测定。若血清或血浆中不含HBsAg,通过洗涤除去未结合物,加底物后就不显色。
上海恒远技术部做出评价:“由于应用McAb,双位点一步法具有很高特异性,一步法省时、简便。当待检抗原浓度过高时,大量过剩抗原分别饱和固相McAb和酶标McAb而抑制夹心复合物的形成,这种现象称为钩状效应,可出现假阴性结果。可将待检标本稀释后再做或提高抗体试剂的亲和力、浓度、纯度定以消除钩状效应。”
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