您能够掌控好简单而复杂的ELISA实验吗?当然,对实验的熟练度与了解度还是要靠长时间积累经验的。我公司技术部人员总结出ELISA实验心得,一起来看看吧!
上海恒远生物透彻分析酶联免疫试剂盒实验:
ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式,测定操作非常简单,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、大鼠ELISA试剂盒洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。
尽管ELISA测定的操作步骤非常简单,但有可能会影响测定结果的因素却较多,分布在测定操作的各步之中,尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因,特对常见问题及原因归纳总结于下表。
ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因问题可能的原因(非试剂盒本身的原因):
1. 弱阳性质控样本检测不出 温育的时间或温度不够;显色反应时间太短;所用配制缓冲液的蒸馏水有问题
2. 测定的重复性差(相同样本两次测定结果不一致)这是典型的由测定操作引起的问题,包括加样本及试剂量不准;孔间不一致;加样过快,孔间发生污染。
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为什么重组蛋白作为我的ELISA的对照有差异?
首先要考虑的是重组蛋白的质量会高出试剂盒的可测试范围数倍,必须将重组蛋白稀释多次才能得到试剂盒的测试范围。一般来说是从mg/毫升稀释到pg/毫升,在这中间光是移液管的误差就达到了可测量的水平。
其次要考虑的是R&D的免疫测试方法测量的蛋白水平是用一种抗体捕获的、用第二种抗体测定的,这种测定是在试剂盒研发时与标准蛋白校正过的。这些经过测定的早期标准蛋白成为基本校正物,后来的标准都同它校正。这样不同生产批号的免疫测定试剂盒将是一致的。这些基本校正物蛋白质量的测量方法也许与你的试剂管中蛋白质量的测定方法有所不同。
酶联免疫实验前的五项准备:
1. 使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
2. 准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等
3. 浓缩洗液与医用蒸馏水1:19倍稀释后成为应用洗涤液
4. 浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1:4倍稀释成应用样品稀释液
5. 应用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。
我司提供免费检测服务:使用上海恒远ELISA试剂盒只收取试剂盒的费用,其他辅助试剂全部免费。我们将根据实验工作量和难易程度,双方协定实验周期,保质保量完成委托实验,并将实验结果和材料用特快专递免费寄送到您手中。欢迎您我司酶联免疫试剂盒价格。
1. 根据检测标本数量确定所需试剂的量。
2. 用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸上轻轻拍干,还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
3. 应保证ELISA酶标板清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。