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恒远杨经理特别分享,用酶联免疫法检测瘤坏死因子的过程步骤
更新时间:2014-04-01      阅读:1653

    我们今天来给朋友们介绍一个检测实验,我公司所代理的酶联免疫试剂盒因质量的、价格的合理再加上销售部的完善支持使得朋友们的信任,同时上海恒远在这里也表示非常的感谢。今天上午我公司杨发来一则实验说要特别分享给大家,下面我们就来看看用酶联免疫法检测瘤坏死因子的过程步骤。
原理:
    在微孔反应板上包被抗人TNF-α单克隆抗体,待测标本和标准品中的TNF-a会与单克隆抗体结合,游离的成分被洗去,同时加入生物素化的抗人TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合,抗人TNF抗体与结合在单克隆抗体上的人TNF-α结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色剂,若反应孔中有TNF-α,HRP会使无色的显色剂呈现蓝色,加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度,TNF浓度与吸光度成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中的TNF-α浓度。
试剂、材料所需:
    1、预包被微孔反应板
    2、浓缩酶结合物
    3、酶结合物稀释液
    4、标准品和标本稀释液
    5、浓缩生物素化抗体
    6、IFN标准晶
    7、浓缩洗涤液
    8、显色剂A、B
    9、终止液
    10、酶标仪或全自动酶联免疫检测仪 
步骤
    1、在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100txl,再加生物素化抗体工作液50tzl。
    2、振荡混匀,置20-25℃环境中温育120min。
    3、将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥。
    4、除空白孔外,加入酶结合物工作液100u1。
    5、振荡混匀,置20-25℃环境中温育30min。
    6、将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥。
    7、每孔加入显色剂A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37C环境中避光显色10min。
    8、加入终止液50ul后,轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度,与标准曲线对照,求出TNF值。
    以上就是今天的实验内容了,我公司的五折*还剩下十天,需要的朋友们快来订购酶联免疫试剂盒哦!zui后我们来看下实验中您需要注意的六条事项:
    1、试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封保存。
    2、酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液,防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30~60s的洗涤浸泡时间。
    3、滴加试剂前应将滴瓶翻转数次,使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。
    4、所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol/L硫酸,使用时应注意安全。
    5、每批样本应同时做标准曲线。
    6、若标本OD值在标准曲线测定范围以外,应适当稀释后重测。

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