技术部李工为您亲自总结elisa测定中常见问题及解决办法

如果您想了解ELISA中常见问题以及解决方法，请您耐心的仔细阅读我们的这篇文章。此常见问题由我司技术部李工为您总结： 

     ELISA是酶联免疫吸附测定的简称，是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。它以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合，由于抗原、抗体反应在一种固相载体—ELISA是酶联免疫吸附测定的简称，是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。ELISA以操作简便、灵敏度较高、特异性较好等特点而在临床上获得广泛应用，尤其是各型病毒性肝炎感染标志物的检测。但其操作步骤较多，各个环节都可能对其检测效果产生影响．所以有必要对于临床操作中可能出现的问题及其解决办法加以探讨。  我们公司技术部经过长期以来的检测实验，特将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。

下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：

    1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

    2 加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2） 加样后及时放入孵箱。 3） 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5） 标本较多时，请分批操作。

    3 孵育 可能原因： 1） 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*； 2） 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。解决办法： 1） 贴封片或加盖； 2） 按说明步骤严格控制操作时间。

    4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2） 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。 3） 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 1） 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2） 合理安排，或多用几台洗板机。

    5 显色 可能原因： 1） 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2） 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 1） 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2） 加样时保持显色剂不外流； 3） A、B液应避免接触金属器械。

    6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。

    7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。 

       其实呢在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

       
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                                                                               上海恒远生化试剂 

                                                                                      2013.9.23