IgA的纯化操作步骤

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IgA的纯化操作步骤

更新时间：2013-08-23

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IgA的纯化

血清中IgA的含量较低，一般从乳汁中提取分泌型IgA。

【材料和试剂】

（1）人初乳Xml。

（2）生理盐水（NS），HCl。

（3）2mol/L Tris，0.1mol/L pH6.3 PB。

（4）0.01mol/L， pH7.5（含0.1mol/L NaCl）和0.01mol/L，pH7.7（含0.25mol/L NaCl）的PB。

【操作步骤】

（1）取Sephadex G-200 25g，经蒸馏水充分膨胀后，以0.01mol/L，pH6.3的PB平衡并装柱，柱床体积为2.5cm×100cm。

（2）将10ml NS缓慢加入初乳中，混匀，43000r/min 4℃离心60min。

（1）吸出中层乳清液，以1mol/L HCl调至pH4.0，4℃ 24000r/min离心30min。

（2）吸取上清以2mol/L Tris 调至pH7.3，同上离心，取上清，以0.45μm硝酸纤维素膜过滤。

（3）收集滤出液过Sephadex G-200层析柱，以0.01mol/L，pH6.8 的PB低温洗脱，0.3～0.5ml/min，分部收集，并以紫外监测仪280nm监测。

（4）*峰以IgM为主，第二峰为IgA，第三峰为IgG，收集合并第二峰各管，装入透析袋中。

（5）对0.01mol/L，pH7.5（含0.1mol/L NaCl）的PB透析4～6h。

（6）过DEAE-Sephadex A-50柱，以0.01mol/L，pH7.5（含0.1mol/L NaCl）的PB洗脱至OD 280nm< 0.02。

（7）改用含0.25mol/L NaCl的PB洗脱，分部收集，280nm测蛋白峰，收集合并含蛋白的洗脱峰，浓缩后置-20℃保存。

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