细胞培养技术中周期的测定
一、原理
     细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器、用品：同常规细胞培养
2、试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液
三、操作步骤
1、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使zui终浓度为10μg/ml。
2、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。
3、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。
4、常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。
5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。
6、弃去2×SSC液，流水冲洗。
7、Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。
8、镜检100个分裂相，计*、二、三、四细胞期分裂指数。
9、计算： 细胞周期（Tc）=48/（小时）
附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十双蒸水10ml   4℃下避光保存。
   （2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，柠檬酸三钠•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存

上海恒远产品涵盖免疫调节蛋白、白介素、集落刺激因子、生长因子、化学趋化因子、干扰素、脂联素、成纤维生长因子、转化生长因子、肿瘤坏死因子、神经营养素和防御素等诸多生命科学研究领域中重要的生物活性分子。 为跟踪当今科研发展、满足日益增长的需求，上海恒远研制出无动物成分的重组蛋白 。这些蛋白是利用专有的无动物成分生产设施，在严格的无动物成分条件下生产出来，因此痕量的动物源性污染引发潜在问题的可能性被降至zui低，从而*达到临床前研究和细胞治疗用标准。此外，上海恒远还开发出无动物成分的培养基添加物试剂盒 。这些试剂盒经改良设计，其中的无血清组分对多种哺乳动物细胞的生长有更好的维持能力。