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试剂盒用于酶标仪的检测程序
更新时间:2012-12-06      阅读:1939

酶标比色仪简称酶标仪,通常指于测读ELISA结果吸光度的光度计。针对固相载体形式的不同,各有特制的适用于板、珠和小试管的设计。许多试剂公司配套供应酶标仪。酶标仪的主要性能指标有:测读速度、读数的准确性、重复性、度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可到0.001,准确性为±1%,重复性达0.5%。举例说,若某孔测得的A值为1.083,则该孔相对于空气的真实A值应为1.083±0.01(1.073~1.093),重复测定数次,其A值均应1.083±0.05(1.078~1.088)在之间。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000~2.000,新型号的酶标仪上限拓宽达2.900,甚至更高。超出可测上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同,线性范围常小于可测范围,比如某一酶标仪的可测范围为0.000~2.900,而其线性范围仅0.000~2.000,这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。 酶标仪不应安置在阳光或强光照射下,操作时室温宜在15~30℃,使用前先预热仪器15-30分钟,测读结果更稳定。测读A值时,要选用产物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读,即每孔先后测读两次,*次在zui适波长(W1),第二次在不敏感波长(W2),两次测定间不移动ELISA板的位置。例如OPD用492nm为W1,630nm为W2,zui终测得的A值为两者之差(W1-W2)。双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。各种酶标仪性能有所不同,使用中应详细新闻记者说明书。


酶联免疫试剂盒检测程序
1. 建立标准曲线:设标准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100ul,*孔加标准品100ul,混匀后用加样器吸出100ul,移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔,zui后,从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照,第八孔为零孔。
2. 加样:待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3. 将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
5. 每孔(除零孔)加*抗体工作液50ul,置37℃ 60分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔(除零孔)加酶标抗体工作液100ul(两滴),将反应板置37 oC 60分钟。
8. 洗板:同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反应15分钟。
10. 每孔加入1滴终止液混匀。
11. 在450nm处测吸光值。

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