1.原理
样品脱脂后,用水或乙醇提取,提取液经澄清处理以除去蛋白质等杂质,再用盐酸进行水解,使蔗糖转化为还原糖。然后按还原糖测定方法分别测定水解前后样品液中还原糖含量,两者差值即为由蔗糖水解产生的还原糖量,乘以一个换算系数即为蔗糖含量。
2.仪器
①25 mL古氏坩埚或G4垂融坩埚。
②真空泵。
③滴定管。
④水浴锅。
3.试剂
①6 tool·I。1盐酸溶液。
②5 mol·L叫氢氧化钠溶液:称取20 g氢氧化钠加水溶解并稀释至100 mL。
③l tool·L1氢氧化钠溶液:称取4 g氢氧化钠加水溶解并稀释至100 mI。
④费林试剂甲液:称取34.639 g硫酸铜(CuS()4·5H20),加适量水溶解,加人0.5 mI硫酸,加水稀释至500 mL,用精制石棉过滤。
⑤费林试剂乙液;称取173 g酒石酸钾钠和50 g氢氧化钠,加适量水溶解并稀释到500 mL,用精制石棉过滤,贮存于橡皮塞玻璃瓶中。
⑥精制石棉:取石棉先用3 tool·I。叫盐酸浸泡2~3 h,用水洗净,再用10%氢氧化钠浸泡2~3 h。倾去溶液,再用碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时,用水洗净,再以3 mol·L1盐酸浸泡数小时,用水洗至不呈酸性。加水振荡,使之成为微细的浆状软纤维,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用于填充古氏坩埚。
⑦O.02 mol·I。q高锰酸钾标准溶液:称取3.3 g高锰酸钾溶于1 050 mL水中,缓缓煮沸20~30 min,冷却后于暗处密闭保存数日,用垂融漏斗过滤,保存于棕色瓶中。标定:称取150~200℃干燥1~1.5 h的基准草酸钠约O.2 g,溶于50 mI。水中;加80 mI。硫酸,用配制的高锰酸钾溶液滴定,接近终点时加热至70℃,继续滴至溶液呈粉红色30 s不褪为止。同时作空白试验。
⑧硫酸铁溶液:称取50 g硫酸铁,加人200 mL水溶解后加入i00 mL硫酸,冷却后加水稀释至1 000 mL。
⑨3 tool·L叫盐酸溶液:量取30 mI。浓盐酸,加水稀释至120 mL。
⑩甲基红乙醇溶液(O.1%):称取0.1 g甲基红,用60%乙醇溶解并定容到100 mL。
4.操作步骤
①样品处理
a.乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约0.5~2 g固体样品(吸取2~10 mL液体样品),置于250 mL容量瓶中,加50 mL水,摇匀。加入10 mL碱性酒石酸铜甲液、4 mLl tool·L叫NaOH溶液,加水至刻度,混匀。静置30 rain,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。(此步骤目的是沉淀蛋白质)
b.酒精性饮料:吸取100 mL样品,置于蒸发皿中,用1 tool·L一,NaOH溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后(注意保持溶液pH为中性),移人250 mL容量瓶中。加50 mL水,混匀。以下按a中从“加入10 mL碱性酒石酸铜甲液”起依次操作。
c.含淀粉多的食品:称取2~10 g样品,置于250 mL容量瓶中,加200 mL水,在45℃水浴中加热1 h,并时时振摇(此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下会糊化、水解,影响测定结果)。冷却后加水至刻度,混匀,静置。吸取200 mL上清液于另一250 mL容量瓶中,以下按a中从“加入10 mI。碱性酒石酸铜甲液”起依次操作。
d.含有脂肪的食品:称取2~10 g样品,先用乙迷或石油醚淋洗3次,去除醚层。加入50mL水混匀,以下按a中从“加入10 mL碱性酒石酸铜甲液”起依次操作。
e.汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取100 mL样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250 mI一容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后,备用。
②样品水解:吸取2份50 mI。样品处理液,置于100 mL锥形瓶中,一份加5 mL 6 mL叫盐酸,在68~70℃中水解15 min(如果温度过高或时间过长,一些大分子糖也会被水解)。冷却后加2滴甲基红指示剂,用5 tool·I.1氢氧化钠溶液中和至中性,转至容量瓶中,加水定容至100 mL,混匀,此液为样品水解液。另一份直接加水稀释至100 mL,此液未水解。
③样品测定:分别吸取②中样品水解液和直接加水稀释的溶液各50 mL,分别于两个400mL烧杯中,各加入25 mL碱性酒石酸铜甲液及25 mI。乙液,于烧杯上盖一表面皿,加热,控制在4 rain内沸腾,再准确煮沸2 rain,趁热用铺好石棉的古氏坩埚或G。垂融坩埚抽滤,并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀,至洗液不呈碱性为止。将古氏坩埚或垂融坩埚放回400 mL烧杯中,加25 mL硫酸铁溶液及25 mL水,用玻棒搅拌使氧化亚铜*溶解,分别以0.1000tool·L_。高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。同时吸取50 mL水,加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液,硫酸铁溶液及水,按同一方法做试剂空白实验。
5.计算
6.说明
①这里用的是高锰酸钾滴定法测定还原糖,也可用直接滴定法测定还原糖。
②蔗糖的水解条件远比其他双糖的水解条件低,在本方法规定的水解条件下,蔗糖可*水解,而其他双糖和淀粉等的水解作用很小,可忽略不计。
③用还原糖法测定蔗糖时,为减少误差,测得的还原糖含量应以转化糖表示。因此,选用直接滴定法时,应采用0.1%标准转化糖溶液标定碱性酒石酸铜溶液。
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