人氧化型谷胱甘肽试剂盒操作原理

本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                                                                                    96T
5µg/L -160µg/L  
 
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。

实验原理：

 人氧化型谷胱甘肽试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平。用纯化的人氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化型谷胱甘肽（GSSG），再与HRP标记的氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的氧化型谷胱甘肽（GSSG）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。

人氧化型谷胱甘肽试剂盒操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
160µg/L  5 号标准品  150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
80µg/L  4 号标准品  150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
40µg/L  3 号标准品  150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
20µg/L  2 号标准品  150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
10µg/L  1 号标准品  150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液  
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。       
4.  配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。   
7.  温育：操作同3。
8.  洗涤：操作同5。
9.  显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。